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聚丙烯酰胺凝胶电泳基础知识
 
聚丙烯酰胺凝胶电泳基础知识
 
  丙烯酰胺是一种白色晶体化学物质,是生产聚丙烯酰胺的原料。聚丙烯酰胺主要用于水的净化处理、纸浆的加工及管道的内涂层等。淀粉类食品在高温(>120℃)烹调下容易产生丙烯酰胺。在分子生物学中,丙烯酰胺单体和甲叉双丙烯酰胺交联剂在催化剂(如过硫酸铵)作用下形成的凝胶。凝胶孔径大小可以通过制备时所使用的浓度和交联度控制。常用做层析介质、电泳分离支持材料等,常用于用于分离蛋白质和寡糖核苷酸。作用原理 聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE);非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开,分离DNA片段一般用非变性聚丙烯酰胺凝胶。凝胶孔径大小可以根据丙烯酰胺单体和甲叉双丙烯酰胺比例及溶液浓度来调节,浓度越大孔径越小,分离物质分子量越小。一 般说来,含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶,机械性能适用于分离分子量范围1万至100万物 质,1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶,而分子量特别大的可采用含 丙烯酰胺4%的凝胶。丙烯酰胺单体和甲叉双丙烯酰胺交联剂的比例一般有三种:19:1的一般用于DNA测序,29:1和37.5:1用于蛋白分离,现在DNA电泳一般也用29:1的混合物。市场上买的粉末试剂多为单品高纯,溶液试剂多为两者按比例混合溶液,可直接使用。
 
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